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溶菌酶的性子及制备方式有哪些?
阅读次数:860宣布日期:2021-07-07

溶菌酶(lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycanohydrlase),是一种能水解细菌中黏多糖的碱性酶。溶菌酶首要经由进程粉碎细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键,使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,致使细胞壁分裂内容物逸出而使细菌消融。溶菌酶还可与带负电荷的病毒卵白间接连系,与DNA、RNA、脱辅基卵白构成复合体,使病毒失活。 该酶普遍存在于人体多种构造中,鸟类和家禽的蛋清、哺乳植物的泪、唾液、血浆、乳汁等液体,和微生物也含此酶,此中以蛋清含量最为丰硕。 此中按照其来历的差别,能够将其分为四类,别离是植物溶菌酶、植物溶菌酶、微生物溶菌酶和蛋清溶菌酶。

性子:
1、溶菌酶纯品呈红色、微黄或黄色的结晶体或无定形粉末,无异味,微甜,易溶于水,不溶于丙酮、乙mi。溶菌酶遇碱易被粉碎,但在酸性情况下,溶菌酶对热的不变性很强,在pH值为4-7时,100℃处置1min,仍能较好地坚持活气:pH值为3时,本事100℃加热处置45min。 
2、溶菌酶化学性子很是不变,当pH值在必然规模内猛烈变更时,其布局几近不变。溶菌酶不可逆变性的临界点是77℃,随溶剂的变更,不可逆变性临界点也产生变更,当溶菌酶所处溶液pH值小于1时,不可逆变性临界点降落到43℃。  
3、溶菌酶最适pH为5.3~6.4,可用于低酸性食物防腐; 溶菌酶作为防腐剂宁静性高,可被冷冻或枯燥处置,且活气不变。 
4、溶菌酶对几种变性剂的敏感水平为:二恶烷>二甲基乙酰胺>二甲基甲酰胺>丙酮,并且随溶剂用量的增添而直线降落。 

制备方式:
今朝溶菌酶能够以鸡蛋清和蛋壳膜为资料提取制得,经常操纵的方式有亲和层析法、离子互换树脂法、间接结晶法和聚丙烯酸积淀法等。 
1、亲和层析法
亲和层析法是操纵卵白质和酶的生物学特同性,即卵白质或酶与其配体之间所具备的专注性亲和力而设想的色谱手艺。酶一底物复合物构成以后,在必然的前提下分手复合物便取得纯洁的酶。经常操纵的吸附剂为几丁质及其衍生物,如:几丁质粉、羧甲基几丁质、几丁质包埋纤维素、脱氨几丁质粉、N-酰化壳聚糖、脱氨再生几丁质凝胶。 

2、离子互换树脂法
离子互换法是操纵离子互换剂与溶液中的离子之间所生的互换反映来停止分手的,分手的结果较好,普遍用于微量组分的富集。普通流程为:鲜蛋一预处置一搅拌吸附一上柱洗脱一等电点积淀一透析一喷雾枯燥一制品。 
溶菌酶在等电点以下较普遍的pH值规模内,份子带正电荷,可吸附于弱酸性阳离子互换树脂上,洗脱后盐析,可得溶菌酶积淀,再停止精制可得制品。蛋清吸附724树脂,洗濯缓冲液洗脱,硫酸铵溶液盐析透析,用NaOH去碱性卵白,冻干溶菌酶,冻干粉积淀枯燥取得溶菌酶。在5—10℃下,将新颖蛋清540kg插手到已处置好的80kg 724树脂中,搅拌吸附6h,在0—5℃静置留宿。倾出下层蛋清,树脂离心甩干,用蒸馏水频频洗去黏附的卵卵白,而后将树脂装入柱内,用0.15mol/L、pH=6.5磷酸缓冲溶液约150L洗濯树脂,再用约600L的10%硫酸铵溶液洗脱,搜集洗脱液。洗脱液中加硫酸铵,使终究含硫酸铵量为40%,有红色积淀天生,冷处安排留宿。虹吸下层清液,积淀吸滤抽干,再用1倍蒸馏水消融积淀呈稀糊状,而后装入透析袋,在约5℃的前提下,对蒸馏水透析24h摆布,中心换水2—3次。离心去除积淀,积淀再用少许水洗一次,洗液与离心液归并。再往透析清液中渐渐插手1mol/L氢氧化na溶液,同时不时搅拌,使pH值回升到8.0—9.0,若有红色积淀,即离心撤除。而后用3mol/L盐酸调pH=5.0,冷冻枯燥,即得红色片状溶菌酶。也可将离心液用3mol/L盐酸调pH=3.5,在搅拌下迟缓插手5%的固体氯化钠,在约5℃的温度下静置48h,离心,积淀用0℃丙酮洗濯,枯燥,即得溶菌酶。 

3、食盐间接结晶法
在蛋清中插手必然量的碘化物或碳酸盐等盐类,并调pH值至9.5—10.0,溶菌酶会以结晶情势渐渐析出,而大大都卵白质依然在溶液。在超滤稀释脱盐后,为取得较纯产物,接纳结晶纯化酶液经超滤处置后,用NaOH调剂pH 9.5,离心去除。上清液在徐徐搅拌下,加NaCl至5%,静置一周,得粗结晶。结晶溶于pH 4.6醋酸水中,分去不溶物后,停止重结晶,结晶的终究得率为60%摆布。即每千克蛋清中可得重结晶品近1.3 g,活气测定为8000U/mg。 

4、聚丙烯酸积淀法
聚丙烯酸积淀法为将提取过滤后含酶洗脱液,起首颠末吸附步骤,行将过滤后的廓清溶液用20%的NaOH溶液调pH至6.0,在调pH值的进程中不停的搅拌。有少许的乳红色积淀析出,而后插手15%聚丙烯酸,立即有红色积淀析出,加至pH值为3.0为止,静置17个小时停止静析,取得粘附于底部的乳红色胶状物。第二步解离,将前步取得的溶菌酶聚丙烯酸凝集物。插手少许蒸馏水并用0.5 mol/L的碳酸钠,将其消融,转移后,将pH值调到9.5。插手5%CaCl2溶液将溶菌酶聚丙烯酸解离,至无积淀析出,而后过滤,取得廓清溶液。第三步盐析,将所得廓清溶液插手5%的NaCI溶液搅拌平均。放入冰箱调温度为0℃。待有晶体析出后,用无水乙醇洗濯数次,置恒温培育箱中40℃前提下枯燥称重。